CST測(cè)試ELISA試劑盒的可靠性

發(fā)布時(shí)間： 2024-03-22　　點(diǎn)擊次數(shù)： 415次

即用型 ELISA 試劑盒無需科研工作者花費(fèi)時(shí)間摸索優(yōu)化條件，因此可以簡化研發(fā)的工作流程。其中至關(guān)重要的是，科研工作者選擇的 ELISA 試劑盒需要具有批次間高度可重復(fù)性，才能得到如預(yù)期的項(xiàng)目進(jìn)展。如果您的實(shí)驗(yàn)持續(xù)很長，但所使用的 ELISA 試劑盒批號(hào)中途變更了，那您需要確保新、老批次的表現(xiàn)是一致的、產(chǎn)生相似的信號(hào)/空白比，且任何批次間差異需在可接受的變異系數(shù) (%CV) 值范圍內(nèi)。

抗體作為 ELISA 試劑盒的核心組分，與可重復(fù)性危機(jī)密切相關(guān)，即人們?nèi)找嬲J(rèn)識(shí)到的許多科學(xué)實(shí)驗(yàn)無法重復(fù)。確保實(shí)驗(yàn)可重復(fù)，需要研究人員謹(jǐn)慎選擇產(chǎn)品，并且要求抗體制造商確保高質(zhì)量、經(jīng)過很嚴(yán)格驗(yàn)證的產(chǎn)品供科研工作者使用。至關(guān)重要的是，抗體應(yīng)對(duì)其靶標(biāo)表現(xiàn)出高度特異性，并應(yīng)在其所適用的應(yīng)用中都經(jīng)過嚴(yán)格驗(yàn)證。

在 CST，開發(fā)和上市銷售抗體時(shí)，我們堅(jiān)持遵守 Hallmarks of Antibody Validation^™，以確保您獲得自己可以信任的數(shù)據(jù)。對(duì)于不同的抗體，會(huì)選擇這六種補(bǔ)充性驗(yàn)證策略中合適的方法對(duì)抗體進(jìn)行嚴(yán)格驗(yàn)證，進(jìn)而確保抗體在任何測(cè)定法中的特異性、靈敏度和功能性符合要求。這意味著，當(dāng)選擇 CST^® 抗體時(shí)，該抗體的性能保證在我們公司產(chǎn)品保證范圍內(nèi)。

我們的抗體是即用型 FastScan^™、PathScan^® 和 PathScan^® Rapid Protocol (RP) ELISA 試劑盒的基礎(chǔ)，所有這些試劑盒均使用雙抗夾心法，與直接和間接 ELISA 相比，靶標(biāo)特異性更加優(yōu)異。在設(shè)計(jì)和生產(chǎn) ELISA 試劑盒時(shí)，通過確定最佳抗體對(duì)并預(yù)先進(jìn)行所有試劑盒的開發(fā)和驗(yàn)證，來確保您項(xiàng)目全程數(shù)據(jù)的質(zhì)量。

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作為產(chǎn)品科學(xué)家，在 CST 工作的6年間，我的大部分職責(zé)是測(cè)試公司 ELISA 試劑盒的批間差異，以確保批次間的一致性。科學(xué)可重復(fù)性是 CST 的核心價(jià)值觀，這在我們嚴(yán)格驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)中已體現(xiàn)。最終，我們希望無論客戶收到哪一批次的試劑盒，他們的研究可以不中斷，且結(jié)果可信任。通過按照公司既定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 (SOP) 生產(chǎn)每個(gè)批次的ELISA 試劑盒，可確保研究人員獲得的結(jié)果具有一致性、可靠性。

ELISA 試劑盒批次測(cè)試要求

在向研究人員提供任一新批次 ELISA 試劑盒之前，我們都進(jìn)行一系列全面測(cè)試。這些測(cè)試起到確認(rèn)新批次對(duì)目的靶標(biāo)具有高度特異性（低背景信號(hào)）、與當(dāng)前批次相當(dāng)?shù)撵`敏度和具有產(chǎn)生寬動(dòng)態(tài)范圍靈敏度曲線的能力。

我們會(huì)進(jìn)行如下測(cè)試：

有陽性對(duì)照和陰性對(duì)照的測(cè)試

根據(jù) ELISA，用于驗(yàn)證目的的對(duì)照可以是生物學(xué)相關(guān)的樣品或靶標(biāo)蛋白內(nèi)源水平已知（高表達(dá)和低表達(dá)）的樣品。通過同時(shí)用老批次和新批次的 ELISA 試劑盒生成不同蛋白質(zhì)濃度下吸光度信號(hào)變化的平行滴定曲線，我們可以確認(rèn)各數(shù)據(jù)集間的關(guān)聯(lián)。由于每個(gè)模型系統(tǒng)都不同，我們建議客戶參考我們的滴定曲線來確定自己的樣品上樣蛋白質(zhì)濃度。

由于我們的 FastScan、PathScan 和 PathScan RP ELISA 試劑盒是對(duì)相對(duì)（而非絕對(duì)）定量進(jìn)行驗(yàn)證，因此它們不包含標(biāo)準(zhǔn)品。相反，我們建議樣品可依據(jù)蛋白質(zhì)含量或細(xì)胞數(shù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。不過，F(xiàn)astScan 試劑盒會(huì)提供凍干的陽性對(duì)照，以驗(yàn)證分析性能。

光密度 (OD) 信號(hào)閾值

對(duì)于待驗(yàn)證的 ELISA 試劑盒批次，陽性對(duì)照樣品必須具有大于 1.5 的絕對(duì)光密度 (OD) 值，而空白樣品的信號(hào)閾值應(yīng)低于 0.3。在測(cè)試我們的 PTM 特異性 ELISA 試劑盒時(shí)，我們還設(shè)置了適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)閾值，以確保磷酸化對(duì)照樣品的信號(hào)顯著高于陰性非磷酸化對(duì)照樣品的信號(hào)。

此外，相對(duì)于最高滴定點(diǎn)，新批次ELISA 試劑盒的信號(hào)/空白比必須大于5.0。該值必須落入類似于現(xiàn)有批次的范圍內(nèi)，以便新批次符合我們的可重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)。

PathScan^® Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) Sandwich ELISA Kit #12001 的信號(hào)/空白比數(shù)據(jù)摘要
濃度 (mg/ml)	#12001 第 34 批	#12001 第 35 批
0.075	18.3	16.9
0.0375	11.9	11.9
0.01875	7.8	7.7
0.009375	4.8	4.8

變異系數(shù)百分比 (%CV) 值

驗(yàn)證新 ELISA 試劑盒批次的另一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)是 %CV。為了生成該值，我們對(duì)新批次中隨機(jī)選擇的三個(gè)板條運(yùn)行滴定曲線，以確定每個(gè)重復(fù)的平均值 (μ) 和標(biāo)準(zhǔn)差 (SD，σ)，然后應(yīng)用以下公式：

%CV = (σ / µ) x 100

對(duì)于待放行的新批次，現(xiàn)有批次與新批次之間的分析間差異必須小于 15%。

PathScan^® Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) Sandwich ELISA Kit #12001 的變異系數(shù)百分比 (%CV) 數(shù)據(jù)摘要
濃度 (mg/ml)	#12001 第 34 批	#12001 第 35 批	標(biāo)準(zhǔn)差	%CV
0.075	2.734	3.115	0.040	1.28
0.0375	1.781	2.201	0.030	1.34
0.01875	1.166	1.425	0.028	1.93
0.009375	0.710	0.894	0.015	1.66

為了確保我們的 ELISA 試劑盒隨時(shí)間推移性能保持一致，同時(shí)沒有信號(hào)的衰減，我們通常在保質(zhì)期過半時(shí)進(jìn)行質(zhì)量控制 (QC) 跟進(jìn)測(cè)試。

為您的下一次 ELISA 實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量結(jié)果

即用型 ELISA 試劑盒可以為您的研究帶來許多益處，前提是要從可靠的制造商購買這些產(chǎn)品。您的測(cè)定結(jié)果的與使用的抗體高度相關(guān)。在 CST，我們使用經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證的高質(zhì)量抗體作為 FastScan、PathScan 和 PathScan RP ELISA 試劑盒的基礎(chǔ)，每個(gè)新批次在可供給客戶之前都經(jīng)過全面測(cè)試。通過核實(shí)每個(gè)新批次的 ELISA 試劑盒與先前的具有相當(dāng)?shù)男阅埽覀冎荚诖_保您的項(xiàng)目按計(jì)劃進(jìn)行，而無任何計(jì)劃外的中斷。

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