發(fā)布時(shí)間: 2024-12-03 點(diǎn)擊次數(shù): 87次
CEPT是美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(NIH)開發(fā)的小分子混合物。由4種成分組成,并取其組成成分(Chroman 1、Emricasan、Polyamines、Trans-ISRIB)的開頭字母命名為“CEPT"。研究表明,CEPT可防止人ES/iPS細(xì)胞(人多能干細(xì)胞:hPSCs)在細(xì)胞傳代中的細(xì)胞應(yīng)激和DNA損傷1)。與強(qiáng)效ROCK抑制劑Y-27632相似,可提高細(xì)胞傳代和凍存時(shí)hPSCs的存活率。此外,與基于hPSCs的胚狀體和類器官形成、單細(xì)胞克隆和基因編輯等干細(xì)胞研究中所用的現(xiàn)有培養(yǎng)方法相比,CEPT還可改善細(xì)胞存活率1,2,3)。FUJIFILM Wako已上線經(jīng)無菌測(cè)試且無需制備的即用型CEPT Cocktail溶液。本產(chǎn)品為經(jīng)過濾器滅菌的溶液,可直接添加至培養(yǎng)基使用。有助于再生醫(yī)療研究。1)Chen, Y. et al. : Nat. Methods, 18(5), 528 (2021).2)Tristan, C.A. et al. : Stem Cell Reports, 16, 3076 (2021).3)Tristan, C.A. et al. : Nat.Protoc., 18, 48 (2022).● 從DNA損傷等細(xì)胞應(yīng)激中保護(hù)ES/iPS細(xì)胞,維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能● 已通過內(nèi)毒素測(cè)試以及支原體陰性檢測(cè)的CultureSure系列以1/1,000的量添加本品至培養(yǎng)基,充分混合后使用。● 本產(chǎn)品為凍存品(-20°C)。為避免反復(fù)凍融,建議根據(jù)使用量分裝凍存。● 溶解時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)沉淀,并非產(chǎn)品質(zhì)量問題,請(qǐng)直接使用。(沉淀于37°C下靜置1~2 h可能會(huì)溶解,請(qǐng)避免反復(fù)冷凍和加熱。)添加CEPT或Y-27632至含bFGF的StemSure® hPSC Δ培養(yǎng)基,在37°C,5% CO2的條件下培養(yǎng)人iPS細(xì)胞201B7株(6孔板 1 well=9.5cm2)。培養(yǎng)經(jīng)過16 h以后,更換不含CEPT或Y-27632的培養(yǎng)基,每2~3天更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)第8天時(shí),確認(rèn)細(xì)胞后,使用4%多聚甲醛固定細(xì)胞,ALP染色后,計(jì)數(shù)細(xì)胞集落。添加CEPT或Y-27632至含bFGF的StemSure® hPSC Δ培養(yǎng)基,在37°C,5% CO2的條件下培養(yǎng)人iPS細(xì)胞201B7株(96孔板)。培養(yǎng)經(jīng)過16 h以后,更換不含CEPT或Y-27632的培養(yǎng)基,每2~3天更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)第13天時(shí),確認(rèn)細(xì)胞后,使用4%多聚甲醛固定細(xì)胞,ALP染色后,計(jì)數(shù)形成細(xì)胞集落的孔數(shù)與空孔數(shù)。通過所有孔數(shù)與細(xì)胞集落形成孔數(shù)之比,計(jì)算細(xì)胞集落形成率。細(xì)胞接種數(shù)少時(shí),添加CEPT的組比添加Y-27632的組形成的細(xì)胞集落更多。【細(xì)胞株】人iPS細(xì)胞201B7株
【培養(yǎng)基】StemSure® hPSC培養(yǎng)基Δ+35 ng/mL bFGFRed:rBC2LCN-635(人iPS細(xì)胞膜染色)※ BC2LCN是一種對(duì)存在與人ES/iPS細(xì)胞的膜表面的糖鏈具有高親和性的重組凝集素添加CEPT時(shí)與添加Y-27632時(shí)都未觀察到細(xì)胞形態(tài)的差異,均可確認(rèn)未分化維持狀態(tài)。※ 僅供實(shí)驗(yàn)研究用,不可用于臨床診斷。
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